Aislamiento, producción y caracterización de Exosomas

Los exosomas son vesículas extracelulares pequeñas (~40-150 nm) que liberan todo tipo de células y que se encuentran en los fluidos corporales y en los sobrenadantes de los cultivos celulares. Los exosomas se generan por la fusión de un endosoma especializado, el cuerpo multivesicular (MVB), con la membrana plasmática. Los exosomas permiten la transferencia de información celular, y contribuyen así a la comunicación intercelular en muchos importantes procesos biológicos.

Purificación y Aislamiento de Exosomas

Immunostep ha desarrollado una serie de protocolos para el aislamiento y la purificación de exosomas derivados de múltiples fuentes, incluidas las muestras de cultivos celulares y los fluidos humanos como el plasma, la orina, el líquido cefalorraquídeo, el líquido amniótico, el líquido de lavado broncoalveolar, el líquido sinovial, el esperma, la saliva, los derrames malignos y pleurales de ascitis y la leche materna.

Ultracentrifugación

La ultracentrifugación es un método basado en la densidad y el tamaño bajo la fuerza centrífuga y es aún  el método más común para el aislamiento de vesículas extracelulares, aunque puede producir cierta agregación de vesículas extracelulares.

Precipitación

Es una técnica basada en  en la solubilidad de las vesículas extracelulares, es  un método rápido, con alta recuperación aunque suele precipitar material que no corresponde a vesículas extracelulares.

Columnas de Exclusión por Tamaño (SEC)

Este es probablemente el método más adecuado, solo o combinado, para aislar exosomas de muestras biológicas y, en particular, del plasma/suero, ya que permite separar los exosomas de contaminantes importantes como las proteínas y las HDL. Además, Immunostep dispone y comercializa columnas para la separación de exosomas de diferentes tamaños. 

Captura por inmunoafinidad

Este es un método basado en el uso de microesferas magnéticas, y permite el aislamiento específico de exosomas a través de la visualización de un marcador específico en la membrana. Por ejemplo: CD63, EpCAM, PD-L1, etc.

Protocolos de Purificación de Exosomas

Contamos con una amplia gama de protocolos para el aislamiento y purificación de exosomas a partir de todo tipo de muestras, pudiendo proporcionar así una solución personalizada para cada proyecto, con resultados con alta pureza, óptima recuperación y compatible con cualquier procesamiento o análisis posterior. 

Estamos deseando conocer sus necesidades de investigación en Exosomas

Métodos de Caracterización de Exosomas

Hemos desarrollado e implementado varios métodos de caracterización y validación, tanto con fines de investigación como clínicos, que permiten analizar la pureza y la composición y cuantificar la carga exosomal, que contiene información crítica que ha demostrado ser muy prometedora para el diagnóstico, el pronóstico y el uso terapéutico de una amplia variedad de enfermedades. Estos métodos incluyen:

  • Microscopía electrónica de transmisión (TEM)

  • Microscopía electrónica de barrido (SEM)

  • Análisis de seguimiento de nanopartículas (NTA) 

  • Western blot (WB)

  • Citometría de Flujo

  • Clasificación celular por fluorescencia (FAQS)

  • Ensayos Multiplex por Microesferas

  • Ensayo inmunoenzimático (ELISA)

  • Análisis de la expresión génica (mRNA y microRNA)

Microscopía electrónica: exosomas aislados por microesferas magnéticas.

Fluorescencia: clasificación celular activada (FACS)

Análisis de seguimiento de nanopartículas (NTA) Informe de análisis de tamaño y concentración de partículas.

Caracterización de Exosomas

La caracterización y el análisis de los exosomas presenta una enorme oportunidad clínica y, en concreto, en el ámbito de la biopsia líquida. Sin embargo, para aprovechar este potencial es necesario detectar y caracterizar los exosomas con gran precisión y reproducibilidad, lo que puede suponer un reto para cualquier proyecto o investigación. Immunostep pone a disposición de sus clientes toda su experiencia y capacidad técnica en el campo de los exosomas, para hacer realidad el uso clínico de estas vesículas extracelulares.

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