ExoStepTM KIT: El método más preciso de detección de exosomas desarrollado hasta la fecha
El kit ExoStepTM es el método más preciso de aislamiento de exosomas desarrollado hasta la fecha, una alternativa superior para la detección sensible de exosomas en comparación con los métodos más utilizados. Nuestro kit es fácil de implementar y analizar para cualquier laboratorio que tenga acceso a un citómetro de flujo convencional.
Detección específica de exosomas en fluidos biológicos mediante Citometría de Flujo
Amplio rango dinámico y límite de detección
Permite el inmunofenotipado simultáneo de la población de exosomas capturada
Ensayo fácil de realizar con resultados cuantitativos y escalables
Detección específica e inequívoca de exosomas en fluidos biológicos mediante Citometría de Flujo
El kit ExoStepTM es un ensayo para la detección de exosomas utilizando un anticuerpo de captura unido a una microesfera y un anticuerpo de detección conjugado con fluorocromo. Este kit proporciona resultados reproducibles y está destinado al análisis por Citometría de Flujo de exosomas humanos pre-enriquecidos a partir de biofluidos (plasma, suero, orina, entre otros) o medios de cultivo celular.
No es necesaria la ultracentrifugación
Resultados reproducibles
Eficaz con pequeñas cantidades de muestra
Ensayo basado en microesferas para Citometría de Flujo
El kit ExoStepTM para la Detección y Caracterización de exosomas por Citometría de Flujo está compuesto por un reactivo de captura de exosomas consistente en perlas magnéticas de 6 µm de diámetro recubiertas con un anticuerpo específico como soporte sólido detectable por el citómetro. Además, las perlas de captura están teñidas de rojo y marcadas fluorescentemente, lo que facilita su detección en el detector fluorescente de un citómetro de flujo convencional. ExoStepTM contiene un anticuerpo detector conjugado fluorescentemente para la detección de exosomas.
Amplio rango dinámico y límite de detección
Para determinar el rango dinámico y el límite de detección del ensayo, se realizaron experimentos de valoración de EVs utilizando CD63 para la captura y CD9 para la detección. La sensibilidad del ensayo ha demostrado ser muy alta, detectándose una señal positiva con tan solo treinta ng de exosomas, mientras que para la detección por Western Blot se necesitaron 2 ug. Además, los datos de citometría de flujo siguen una distribución lineal entre 30 y 8 microgramos de exosomas, lo que permite interpolar los valores de intensidad fluorescente para estimar la cantidad de exosomas en la muestra.
Inmunofenotipado simultáneo
Teniendo en cuenta los resultados de la detección directa de exosomas en fluidos corporales, queremos anticiparnos a las necesidades de los investigadores para la caracterización de subpoblaciones de exosomas mediante marcadores específicos. Para optimizar el protocolo, realizamos un ensayo de inmunofenotipado simultáneamente con la detección de exosomas. Esta optimización del protocolo permitió incluir en el canal FL2 (el más sensible), el anticuerpo contra el marcador de interés. Se confirmó la idoneidad del kit para la detección específica de exosomas, posibilitando la caracterización adicional de su fenotipo mediante el marcaje con otros marcadores de interés.
ExoELISA-Step es un inmunoensayo enzimático para la detección y cuantificación de exosomas, basado en el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma que los conjugados resultantes tienen actividad tanto inmunológica como enzimática. Como uno de los componentes (antígeno o anticuerpo) está marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte (inmunosorbente), la reacción antígeno-anticuerpo permanecerá inmovilizada y, por lo tanto, es fácilmente revelada por la adición de un sustrato específico. Al actuar sobre la enzima una vista simple o cuantificable producirá un color observable utilizando un espectrofotómetro o un colorímetro.
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