Producción de Péptidos

Esto afecta no sólo a la facilidad de ensamblaje de los aminoácidos, sino también a la solubilidad, la estabilidad y el posterior proceso de purificación.

La mayoría de los péptidos de interés, como los utilizados como antígenos, proceden de los extremos N-terminal, C-terminal o del interior de una secuencia de proteínas nativas, por lo que estos péptidos no siempre son ideales.

Algunos pueden ser insolubles o inestables, otros pueden causar problemas de purificación, mientras que, en otros casos, el plegamiento puede no ser similar al de las proteínas nativas.

Gracias a la experiencia adquirida a lo largo de los años, en Immunostep podemos localizar esos aminoácidos problemáticos y modificarlos mejorando las cualidades de los péptidos sintetizados.

Durante la producción se pueden realizar diversas modificaciones en función de las necesidades de nuestros clientes, por ejemplo, cubrir regiones N-term o C-term, según sea necesario, realizar modificaciones químicas, insertar espaciadores o sustituir aminoácidos «problemáticos».

Uno de los factores más críticos en la síntesis y purificación es la longitud excesiva. Por ejemplo, en Immunostep recomendamos no superar nunca los 10-15 aminoácidos para los péptidos utilizados como antígenos, ya que serán ideales al mantener la estructura del epítopo lineal en las proteínas nativas.

La hidrofobicidad afecta considerablemente a la solubilidad de los péptidos; en este sentido, nuestra experiencia nos permite aumentar la solubilidad de los péptidos adaptando la frecuencia de los distintos aminoácidos en función de sus características hidrófilas y/o hidrófobas.

Los péptidos de alta incidencia, como el triptófano, la leucina, la valina, la metionina, la fenilalanina o la isoleucina, pueden no disolverse en soluciones acuosas, lo que nos permite mantener la proporción de estos aminoácidos hidrófobos por debajo del 50%, asegurando al mismo tiempo la existencia de al menos un aminoácido cargado por cada cinco residuos.

En pH fisiológico, la arginina, la glutamina, el ácido aspártico y la lisina están cargados en sus cadenas laterales. Un simple cambio o la eliminación de algunos residuos polares en los extremos N-term o C-term puede influir positiva o negativamente en la solubilidad.

Durante el proceso de síntesis del péptido, la formación de láminas β puede afectar a la solvatación y a la síntesis ordenada del péptido, provocando pérdidas en sus diferentes zonas.

Podemos reducir el número de estas eliminaciones y la aparición de productos no deseados en la síntesis recomendando la eliminación de zonas en las que haya múltiples o adyacentes residuos de valina, isoleucina, tirosina, fenilalanina, triptófano, leucina, glutamina o treonina. En la mayoría de los casos, los cambios conservadores, así como otras medidas aplicadas durante la síntesis, pueden mejorar las posibilidades de éxito en cuanto a pureza y calidad. Medidas como la inserción de glicina o prolina, cada tres residuos, o la sustitución de glutamina por asparagina, o de treonina por serina.