Servicios Personalizados de Exosomas

Los exosomas son vesículas extracelulares (EVs) pequeñas (~40-150 nm) liberadas por todo tipo de células y presentes en fluidos corporales y sobrenadantes de cultivos celulares. Los exosomas se generan por la fusión de un endosoma especializado, el cuerpo multivesicular (MVB), con la membrana plasmática. Se ha propuesto que los exosomas proporcionan medios para el intercambio intercelular de macromoléculas, permitiendo la transferencia de información celular, contribuyendo a la comunicación intercelular en procesos biológicos relevantes.

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Aislamiento y Purificación de Exosomas

Immunostep ha desarrollado una serie de protocolos para el aislamiento y la purificación de exosomas de alta calidad derivados de múltiples fuentes, incluidas muestras de cultivos celulares y todos los fluidos proximales humanos, como plasma, orina, líquido cefalorraquídeo, líquido amniótico, líquido de lavado broncoalveolar, líquido sinovial, esperma, saliva, efusiones malignas y pleurales de ascitis y leche materna.

Ultracentrifugación

Basado en la densidad y el tamaño bajo fuerza centrífuga, se considera generalmente como el método estándar de oro para el aislamiento de vesículas extracelulares, aunque puede producir cierta agregación de EVs.

Precipitación

Basado en la solubilidad de las EVs, es un método rápido, con alta recuperación aunque suele precipitar material no EVs.

Cromatografía de Exclusión por Tamaño (SEC)

Este es probablemente el método más adecuado, solo o combinado, para aislar exosomas a partir de muestras biológicas y, en particular, a partir de plasma/suero, ya que permite separar los exosomas de contaminantes importantes como proteínas y HDL. Además, Immunostep dispone de columnas que permiten la separación entre EVs-Exosomas y otras Vesículas Extracelulares.olumns that allow separation between EVs-Exosomes and other Extracellular Vesicles.

Captura por Inmunoafinidad

Basada en el uso de esferas magnéticas, permite el aislamiento específico de exosomas a partir de la visualización en membrana de un marcador específico. Por ejemplo: CD63, EpCAM, PD-L1, etc.

Protocolos de Purificación de Exosomas

En Immunostep hemos desarrollado una amplia gama de protocolos para el aislamiento/purificación de exosomas a partir de todo tipo de muestras, proporcionando una solución personalizada para cada proyecto, con alta pureza y óptimos resultados de recuperación y compatible con cualquier procesamiento o análisis posterior.

Artículo: Métodos de aislamiento de exosomas más utilizados

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Métodos de Caracterización

Hemos desarrollado e implementado varios métodos de caracterización y validación, tanto para fines de investigación como clínicos, que permiten analizar la pureza y composición, y cuantificar la carga exosomal, que contiene información crítica que ha demostrado ser tremendamente prometedora para el diagnóstico, pronóstico y uso terapéutico en una amplia variedad de áreas. Estos métodos incluyen:

Representación gráfica: Composición de los exosomas

  • Microscopía Electrónica de Transmisión (TEM)

  • Microscopía Electrónica de Barrido (SEM)

  • Análisis de Seguimiento de Nanopartículas (NTA) 

  • Western Blot (WB)

  • Citometría de Flujo

  • Clasificación Celular Activada por Fluorescencia (FAQS)

  • Matrices de Microesferas Multiplexadas

  • Ensayo Inmunoenzimático (ELISA)

  • Análisis de Expresión Génica (ARNm y microARN)

Electronic microscopy: exosomes isolated by a capture bead

Fluorescence: activated cell sorting (FACS)

Nanoparticle tracking analysis (NTA).Size and particle concentration analysis report.

Caracterización de Exosomas

La caracterización y el análisis de exosomas presenta una enorme oportunidad clínica y específicamente en el área de la biopsia líquida. Sin embargo, para hacer realidad este potencial es necesario detectar y caracterizar los exosomas con gran precisión y reproducibilidad, lo que puede suponer un reto para cualquier proyecto o investigación. Immunostep pone a disposición de sus clientes toda su experiencia y capacidades técnicas en el campo de los exosomas, para hacer realidad el uso clínico de estas EVs.

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