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Comprender los mecanismos de la muerte celular programada (también conocida como apoptosis) es un aspecto importante en la investigación de, por ejemplo, la homeostasis de los tejidos, las enfermedades tumorales o la toxicidad y eficacia de los fármacos, entre otros.
¿Por qué se utiliza la tinción con Anexina V para detectar la apoptosis?
El anticoagulante vascular humano Anexina V es una proteína de unión a fosfolípidos dependiente de Ca2+ de 35-36KDa que tiene una alta afinidad por la PS. En las células sanas, la PS se localiza en la superficie citoplasmática de la membrana plasmática.
Sin embargo, durante la apoptosis temprana, la fosfatidilserina (PS), normalmente localizada en la superficie citoplasmática de la membrana celular, queda expuesta al entorno extracelular, provocando cambios en la asimetría y permeabilidad de la membrana.
Ensayos Mitocondriales: detección de células apoptóticas tempranas
La disfunción de las mitocondrias es una característica especial de las primeras fases de la apoptosis. Los kits de apoptosis MitoStep miden los cambios en el potencial de membrana mitocondrial con una solución del colorante catiónico de cianina DiIC1(5).
En las células sanas, especialmente en las mitocondrias con potenciales de membrana activos, el colorante se acumula. Durante la apoptosis, la intensidad de la fluorescencia DiIC1(5) disminuye y, por tanto, se produce un aumento de las células con menor fluorescencia DiIC1(5).
MitoStep Kits:
Se ha descrito la despolarización de las submitocondrias y, por tanto, cambios en la membrana mitocondrial durante las primeras fases de la apoptosis. Esta es la razón por la que la captación mitocondrial de colorantes catiónicos es una posible fuente de variación de la fluorescencia.
Las células teñidas con DiIC1(5) pueden visualizarse mediante excitación con un láser de 633 nm y emisión a 658 nm, y combinarse con tinción con FITC o PE.
