{"id":3386,"date":"2021-05-21T09:43:43","date_gmt":"2021-05-21T08:43:43","guid":{"rendered":"http:\/\/sars.imaisd.es\/?p=3386"},"modified":"2023-03-20T11:37:39","modified_gmt":"2023-03-20T10:37:39","slug":"webinar-serologia-sars-cov-2-citometria-flujo","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/immunostep.com\/es\/2021\/05\/21\/webinar-serologia-sars-cov-2-citometria-flujo\/","title":{"rendered":"Webinar | Serolog\u00eda SARS-CoV-2 por Citometr\u00eda de Flujo."},"content":{"rendered":"<h1><strong><strong>Webinar | Serolog\u00eda SARS-CoV-2 por Citometr\u00eda de Flujo.<br \/><\/strong><\/strong><\/p>\n<\/h1>\n<div>\n<p style=\"text-align: center;\">Diferenciando anticuerpos generados tras la infecci\u00f3n natural por SARS-CoV-2 de anticuerpos generados posvacunaci\u00f3n.<\/p>\n<\/div>\n<p><iframe src=\"https:\/\/youtu.be\/2NX7JNboOYQ\"><\/iframe><\/p>\n<div>\n<h3><strong>Informaci\u00f3n del webinar<\/strong><strong>:<\/strong><\/h3>\n<ul>\n<li><strong>Fecha:<\/strong> 9 de junio de 2021<\/li>\n<li><strong>Hora<\/strong>: 17:00 \u2013 18:00h (Madrid, Espa\u00f1a)<\/li>\n<li><strong>Idioma:<\/strong> Espa\u00f1ol\u00a0<\/li>\n<li><strong>Formato:<\/strong>Transmisi\u00f3n online en Zoom &#8211; suscr\u00edbete al webinar para recibir el enlace de asistencia.<\/li>\n<li><strong>Precio<\/strong>: Gratis<\/li>\n<\/ul>\n<h3><strong>Objetivos:<\/strong><\/h3>\n<ul>\n<li>Comprender el funcionamiento de este ensayo por citometr\u00eda de flujo y c\u00f3mo de forma sencilla se detectan 3 inmunoglobulinas para 4 prote\u00ednas virales.<\/li>\n<li>Mostrar en vivo toda la informaci\u00f3n que se genera gracias a la citometr\u00eda de flujo sobre la respuesta inmunol\u00f3gica tras la infecci\u00f3n natural y posvacunaci\u00f3n.<\/li>\n<li>Ronda de preguntas final: Necesidades y oportunidades que ofrece este ensayo como prueba serol\u00f3gica\n<ul>\n<li style=\"list-style-type: none;\">\n<ul><\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n<\/div>\n<h1><strong>Preguntas y Respuestas<\/strong><\/h1>\n<ul>\n<li>\n<h3>\u00bfQu\u00e9 anticuerpos identifica el ensayo?<\/h3>\n<div>\n<p>Este ensayo multiant\u00edgeno por citometr\u00eda de flujo mide la presencia o ausencia de tres inmunoglobulinas (IgG, IgA e IgM) contra cuatro ant\u00edgenos diferentes del SARS-CoV-2 simult\u00e1neamente. Estos 4 ant\u00edgenos son:<\/p>\n<ul>\n<li>Dominio de uni\u00f3n al receptor (RBD) de la glicoprote\u00edna S. Este dominio RBD es un tr\u00edmero estabilizado permite la detecci\u00f3n precisa de anticuerpos neutralizantes del subtipo IgG.<\/li>\n<li>Prote\u00edna SPIKE. Contamos con una glicoprote\u00edna trim\u00e9rica Spike la cual es la forma nativa estabilizada de la prote\u00edna Spike del SARS-CoV-2.<\/li>\n<li>Desde el punto de vista del diagn\u00f3stico, el uso de estructuras trim\u00e9ricas para la SPIKE y el RBD detecta un repertorio m\u00e1s amplio de Anticuerpos Neutralizantes mejorando la sensibilidad y la precisi\u00f3n del monitoreo del estado inmune.<\/li>\n<li>Prote\u00edna de la nucleoc\u00e1pside (N). Esta prote\u00edna es muy inmunog\u00e9nica y es la m\u00e1s abundante del virus. Presenta una gran afinidad por el RNA viral con el que interacciona.<\/li>\n<li>Principal proteasa del virus o la proteasa tipo 3C (3CLpro, Mpro) se caracteriza entre otras cosas porque s\u00f3lo se expresa si el virus entra en nuestras c\u00e9lulas y por ser igual de inmunog\u00e9nica que la Nucleoc\u00e1psida. Investigadores del CSIC demostraron su utilidad para su uso en ensayos serol\u00f3gicos.<\/li>\n<\/ul>\n<p>El motivo principal de analizar los 4 ant\u00edgenos al mismo tiempo radica en la heterogeneidad de la respuesta inmune de cada paciente. Cuanta m\u00e1s informaci\u00f3n obtengamos en an\u00e1lisis de cada paciente, mejor diagn\u00f3stico podremos ofrecer. Al ir dirigido contra 4 ant\u00edgenos es m\u00e1s dif\u00edcil que se escape un falso negativo de un posible infectado o vacunado.<\/p>\n<\/div>\n<\/li>\n<li>\n<h3>\u00bfLa glicoprote\u00edna de la esp\u00edcula es una prote\u00edna recombinante? \u00bfSe puede comparar en su totalidad a la secuencia completa de la prote\u00edna S nativa? \u00bfConservar\u00eda integra la estructura cuaternaria y glicosilaciones? <\/h3>\n<div>\n<p>Efectivamente, la prote\u00edna S utilizada en este kit es una prote\u00edna recombinante y se puede comparar en su totalidad con la secuencia completa de la prote\u00edna S nativa. Adem\u00e1s, conserva \u00edntegra la estructura cuaternaria y glicosilaciones dado que se expresa en un sistema de expresi\u00f3n en mam\u00edferos.<\/p>\n<\/div>\n<\/li>\n<li>\n<h3>\u00bfEs la prote\u00edna Mpro m\u00e1s espec\u00edfica que la Nucleoc\u00e1psida?<\/h3>\n<div>\n<p>Si, la prote\u00edna Mpro ha demostrado ser m\u00e1s espec\u00edfica que la Nucleoc\u00e1psida.<\/p>\n<p>Como prueba de la especificidad llevada a cabo en la validaci\u00f3n del kit, se analiz\u00f3 la posible reactividad cruzada de los anticuerpos contra otros microorganismos que producen s\u00edntomas similares a la infecci\u00f3n por SARS-CoV-2. De esta manera se seleccionaron 15 muestras caracterizadas como positivas para IgG para los siguientes microorganismos: MERS-CoV, H. Influenzae, RSV, Influenza A, Influenza B , Parainfluenza, Adenovirus, Enterovirus M. pneumoniae, Legionella, C. pneumoniae.\u00a0 Como control negativo se usaron muestras prepand\u00e9micas.\u00a0<\/p>\n<p>Observamos en esta prueba c\u00f3mo hay un patr\u00f3n muy claro de que las muestras positivas analizadas no presentan reactividad cruzada con ninguno de estas enfermedades que producen s\u00edntomas similares al SARS-CoV-2. Los resultados obtenidos para la IgM fueron menos espec\u00edficos que para la IgA y la IgG. Adem\u00e1s, de los 4 ant\u00edgenos analizados y que incluye el ensayo, se descubri\u00f3 que la Mpro es m\u00e1s espec\u00edfica que la Nucleoc\u00e1psida. Y esto es debido probablemente a la alta homolog\u00eda que la Nucleoc\u00e1psida con otros coronavirus. La Mpro es la que presenta una menor homolog\u00eda entre otros coronavirus, por lo que la convierte en la prote\u00edna ideal para detectar el SARS-CoV-2.<\/p>\n<\/div>\n<\/li>\n<li>\n<h3>\u00bfTen\u00e9is alg\u00fan ensayo ELISA para la detecci\u00f3n de la prote\u00edna Mpro?<\/h3>\n<div>\n<p>Si, disponemos de un ensayo ELISA para la detecci\u00f3n de anticuerpos IgG e IgA frente a la proteasa Mpro\/3CLpro que ha demostrado ser altamente sensible y espec\u00edfico. Toda la informaci\u00f3n relativa al kit, datos de rendimiento y protocolo de ejecuci\u00f3n lo pueden encontrar en la p\u00e1gina de producto de este ensayo al que puede acceder a trav\u00e9s del siguiente enlace a continuaci\u00f3n.<\/p>\n<\/div>\n<p><a href=\"\/sars-cov-2-elisa-igg-iga-assays\/?lang=es\">Ver m\u00e1s<\/a><\/p>\n<\/li>\n<li>\n<h3>\u00bfQu\u00e9 ventaja tiene a\u00f1adir RBD adem\u00e1s de S? \u00bfhab\u00e9is visto diferencias entre ambas que pod\u00e1is correlacionar con el grado de infecci\u00f3n o tipo de vacuna?<\/h3>\n<div>\n<p>La principal diferencia de informaci\u00f3n que aporta la RBD es que se ha demostrado que los anticuerpos que se generan frente a esta prote\u00edna son neutralizantes, sin embargo, si identificamos la prote\u00edna S en su totalidad, identificaremos tambi\u00e9n anticuerpos no neutralizantes, y de este modo se puede ver la diferencia en la titulaci\u00f3n de los tipos de anticuerpos.<\/p>\n<p>Si, en los estudios que hemos realizado hasta el momento hemos podido observar diferencias relacionadas con el tipo de vacunas, esperamos poder dar m\u00e1s datos sobre estas diferencias pr\u00f3ximamente.<\/p>\n<\/div>\n<\/li>\n<li>\n<h3>\u00bfCu\u00e1l es el fundamento del m\u00e9todo del ensayo?<\/h3>\n<div>\n<div class=\"el-item uk-open\">\n<div class=\"uk-accordion-content uk-margin-remove-first-child\">\n<div class=\"el-content uk-panel uk-margin-top\">\n<p>Este es un ensayo inmunol\u00f3gico basado en microesferas por citometr\u00eda de flujo. En primer lugar, tendremos beads tapizadas con las prote\u00ednas.<\/p>\n<p>Estas beads son microsferas magn\u00e9ticas de 6 micras de tama\u00f1o, autofluorescentes para el canal del FL3 y FL4 y que presentan una discriminaci\u00f3n discreta de intensidad.<\/p>\n<p>Cuando a\u00f1adamos la muestra, los anticuerpos de esa muestra se unir\u00e1n a la microesfera magn\u00e9tica. Estos anticuerpos se encuentran conjugados a tres fluorocromos diferentes: FITC, PE y PE-Cyanine7 respectivamente.<\/p>\n<p>De este modo, cuando incorporemos la soluci\u00f3n en el cit\u00f3metro estos fluorocromos emitir\u00e1n una se\u00f1al del color correspondiente se\u00f1alando la presencia de anticuerpos de cada tipo para cada prote\u00edna que se han unido a la bead.\u00a0<\/p>\n<p>Una importante caracter\u00edstica de estas microsferas es que se suministran a una concentraci\u00f3n de mil microesferas por test. Cada una de estas microesferas se corresponder\u00eda con un ensayo que se realiza en un pocillo tipo ELISA. Esto quiere decir que por cada test que estemos efectuando, es como si estuvi\u00e9semos llevando a cabo 1000 ELISAS de manera simult\u00e1nea. El resultado que obtenemos en cada test es la media de llevar a cabo esos 1000 ELISAS, lo que lo convierte en un ensayo muy potente, fiable y reproducible.<\/p>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/li>\n<li>\n<h3>\u00bfCu\u00e1nto tiempo requiere el ensayo?<\/h3>\n<div>\n<p>En apenas 8 pasos y en un tiempo aproximado de una hora y media, obtendremos las muestras listas para ser analizada en el cit\u00f3metro. Este test es de tipo formato abierto, es decir, que se puede usar en cualquier cit\u00f3metro de flujo, no tiene un equipo dedicado ni tiene que ser analizado con un software espec\u00edfico. Accede a este video para consultar el protocolo completo:<\/p>\n<\/div>\n<p><a href=\"https:\/\/www.youtube.com\/watch?v=Wttj2BaDCtw&#038;t=35s\">Ver video<\/a><\/p>\n<\/li>\n<li>\n<h3>\u00bfEl est\u00e1ndar est\u00e1 calibrado con alg\u00fan est\u00e1ndar internacional?<\/h3>\n<div>\n<p>Si, el ensayo multiplex SARS-CoV-2 ha sido calibrado frente al Primer Est\u00e1ndar Internacional de la OMS para Inmunoglobulina anti-SARS-CoV-2 (humana)<\/p>\n<p>En este sentido, es posible informar cuantitativamente de la concentraci\u00f3n de inmunoglobulinas IgG en Unidades Internacionales (UI\/ml) frente a RBD o en Unidades de Anticuerpos Unidos (BAU\/ml) frente a S, N y Mpro. Para ello, el kit incluye un calibrador o est\u00e1ndar de concentraci\u00f3n con el que poder hacer una recta de calibraci\u00f3n mediante diluciones seriadas para cada uno de los ant\u00edgenos v\u00edricos empleados en el test (RBD, S, N, Mpro) en la que interpolar los valores de fluorescencia resultantes del ensayo de las muestras, obteniendo de esta manera la concentraci\u00f3n en UI\/ml o BAU\/ml correspondiente a cada muestra.<\/p>\n<\/div>\n<\/li>\n<li>\n<p>        <img decoding=\"async\" src=\"\/wp-content\/uploads\/2021\/06\/certificado-de-analisis-preguntas.png\" alt=\"\"><\/p>\n<h3>\u00bfEl kit incluye controles positivos y negativos para IgG, IgA e IgM? <\/h3>\n<div>\n<p>El kit cuenta con controles positivo y negativo para las 3 inmunoglobulinas, (IgA, IgG e IgM). Esos controles vienen en dos viales separados. La funci\u00f3n de los controles positivo y negativo que incluye el kit es la de servir como control de calidad del ensayo, comparando los resultados en UA\/ml con los datos que proporcionamos en el certificado de an\u00e1lisis. A continuaci\u00f3n, mostramos un ejemplo de tabla del certificado de an\u00e1lisis de un lote aleatorio. Estos datos var\u00edan entre lotes, y se proporcionan tras la adquisici\u00f3n del kit.<\/p>\n<p>Tambi\u00e9n destacar que recomendamos utilizar un control positivo y negativo propio de cada laboratorio.<\/p>\n<\/div>\n<\/li>\n<li>\n<h3>\u00bfC\u00f3mo se determina el l\u00edmite de positividad? <\/h3>\n<div>\n<p>Seg\u00fan hemos establecido en la ficha t\u00e9cnica de producto para la interpretaci\u00f3n de los resultados, el umbral o valor lim\u00edtrofe es igual al valor medio a partir de los valores de intensidad mediana de fluorescencia de las r\u00e9plicas correspondientes al control negativo por 3 veces la desviaci\u00f3n est\u00e1ndar.<\/p>\n<p><strong><u>Umbral (valor lim\u00edtrofe) = \u00b5 (mediana) \u00b1 3\u03c3 (del control negativo).<\/u><\/strong><\/p>\n<p>Pueden encontrar toda la informaci\u00f3n sobre los componentes del kit, protocolo de ejecuci\u00f3n e interpretaci\u00f3n de los resultados en la p\u00e1gina de producto de la web accediendo al siguiente enlace.<\/p>\n<\/div>\n<p><a href=\"\/sars-cov-2-multiantigen-igg-iga-assay\/?lang=es\">Ver m\u00e1s<\/a><\/p>\n<\/li>\n<li>\n<h3>\u00bfHay una hoja de reporte tipo del ensayo?<\/h3>\n<div>\n<p>Disponemos de multitud de materiales de consulta sobre este ensayo accediendo a la p\u00e1gina del producto, donde tambi\u00e9n est\u00e1 disponible la ficha t\u00e9cnica del ensayo con toda la informaci\u00f3n de los ensayos realizados para su validaci\u00f3n. A continuaci\u00f3n, dejamos un enlace a esta p\u00e1gina donde poder descargarse dicha informaci\u00f3n.<\/p>\n<\/div>\n<p><a href=\"\/sars-cov-2-multiantigen-igg-iga-assay\/?lang=es\">Ver m\u00e1s<\/a><\/p>\n<\/li>\n<li>\n<h3>\u00bfSe ha validado el ensayo con diferentes plataformas de citometr\u00eda de flujo? <\/h3>\n<div>\n<p>Si, el ensayo ha sido validado para la mayor\u00eda de los cit\u00f3metros de flujo de las marcas comerciales m\u00e1s conocidas como Becton Dickinson, Beckman Coulter y Cytek con resultados \u00f3ptimos.<\/p>\n<\/div>\n<\/li>\n<li>\n<h3>\u00bfHan tenido problemas especiales para configurar el cit\u00f3metro antes de realizar los ensayos? \u00bfqu\u00e9 consejos podr\u00eda dar para evitar problemas durante la adquisici\u00f3n de la muestra? <\/h3>\n<div>\n<p>Para la correcta configuraci\u00f3n de los cit\u00f3metros puede descargar los datos de configuraci\u00f3n para diferentes plataformas en nuestra p\u00e1gina de producto, as\u00ed mismo, en esta misma p\u00e1gina dispone de un video tutorial de c\u00f3mo ejecutar el protocolo del ensayo y c\u00f3mo realizar la estrategia de <em>gating<\/em> en el cit\u00f3metro. En especial, una recomendaci\u00f3n que hacemos en este sentido es no adquirir las microesferas a velocidad m\u00e1xima para evitar dobletes y debris.<\/p>\n<p>Puede acceder al siguiente enlace para descargar estos materiales, o ponerse en contacto con nosotros para informaci\u00f3n adicional personalizada.<\/p>\n<\/div>\n<p><a href=\"\/sars-cov-2-multiantigen-igg-iga-assay\/?lang=es\">Ver m\u00e1s<\/a><\/p>\n<\/li>\n<li>\n<p>        <img decoding=\"async\" src=\"\/wp-content\/uploads\/2021\/06\/160621-Calibur-Preguntas.jpg\" alt=\"\"><\/p>\n<h3>En relaci\u00f3n con la resoluci\u00f3n y separaci\u00f3n de la poblaci\u00f3n de beads en cit\u00f3metros convencionales y no espectrales. \u00bfEs posible que el ruido electr\u00f3nico pueda dificultar la elecci\u00f3n de \u00e9stas o enmascarar resultados? \u00bfel treshold para poder realizar la adquisici\u00f3n debe ser bajo?<\/h3>\n<div>\n<p>La realizaci\u00f3n de este ensayo es \u00f3ptima en cualquier cit\u00f3metro convencional, en la p\u00e1gina de producto del kit proporcionamos los datos de los settings para la configuraci\u00f3n del cit\u00f3metro y en esa informaci\u00f3n viene incluido el treshold para poder realizar la adquisici\u00f3n correctamente.\u00a0 A modo de ejemplo adjuntamos una imagen de c\u00f3mo se separan las 4 poblaciones en un cit\u00f3metro no expectral (BD Facs Calibur). Puede consultar los datos de configuraci\u00f3n del cit\u00f3metro en el siguiente enlace:<\/p>\n<\/div>\n<p><a href=\"\/sars-cov-2-multiantigen-igg-iga-assay\/?lang=es\">Ver m\u00e1s<\/a><\/p>\n<\/li>\n<li>\n<h3>\u00bfTen\u00e9is informaci\u00f3n sobre la respuesta inmune despu\u00e9s de la vacunaci\u00f3n?<\/h3>\n<div>\n<p>Si, realizamos un estudio entre individuos vacunados con vacunas de Pfizer, Moderna y AstraZeneca. Se realiz\u00f3 una comparaci\u00f3n de las respuestas IgG e IgA contra los cuatro ant\u00edgenos del SARS-CoV-2 de 65 individuos vacunados y se compar\u00f3 con la de los individuos infectados naturalmente. Como se esperaba, los individuos vacunados s\u00f3lo mostraron reacci\u00f3n a los ant\u00edgenos S y RBD, y la IgG fue el isotipo predominante en los vacunados mientras que los sueros de los donantes infectados naturalmente presentaban anticuerpos contra los cuatro ant\u00edgenos virales.\u00a0<\/p>\n<p>Gracias a este ensayo podemos confirmar que s\u00f3lo se producen anticuerpos frente a la prote\u00edna empleada en la vacuna, mientras que en una persona que ha sufrido la infecci\u00f3n, tambi\u00e9n se generan anticuerpos frente al resto de ant\u00edgenos incluidos en este test.<\/p>\n<p>Pero como adem\u00e1s el test es tambi\u00e9n cuantitativo, nos permiti\u00f3 saber la concentraci\u00f3n y cantidad de las Ig generadas bien por efecto de las vacunas o por infecci\u00f3n natural. De hecho, en an\u00e1lisis internos hemos confirmado que las vacunas, aunque son intramusculares, generan IgA (para SPIKE y para RBD) y no tanto IgM.<\/p>\n<p>Curiosamente, s\u00f3lo se observaron respuestas m\u00ednimas de IgA en los donantes vacunados, en contraste con los individuos infectados naturalmente que mostraron t\u00edtulos elevados de IgA.<\/p>\n<p>Las diferencias en las respuestas a diferentes isotipos Ig para las 4 prote\u00ednas nos permiti\u00f3 clasificar pacientes vacunados de pacientes que desarrollan anticuerpos como resultado de la vacunaci\u00f3n. Pero, adem\u00e1s, el test nos di\u00f3 informaci\u00f3n sobre la poblaci\u00f3n vacunada, como estaba respondiendo y si estaban generando anticuerpos o no frente a esas vacunas.\u00a0<\/p>\n<\/div>\n<\/li>\n<li>\n<h3>\u00bfPuede este ensayo predecir la enfermedad grave?<\/h3>\n<div>\n<p>Podemos afirmar que, gracias al an\u00e1lisis simult\u00e1neo de los 4 ant\u00edgenos y de las 3 inmunoglobulinas de manera simult\u00e1nea podemos clasificar a los pacientes seg\u00fan la severidad de la enfermedad.<\/p>\n<p>En el proceso de validaci\u00f3n del kit se realiz\u00f3 una prueba de sensibilidad donde se compararon 35 muestras que presentaban s\u00edntomas frente a muestras negativas y\/o pre-pand\u00e9micas que no presentaban s\u00edntomas relacionados con el SARS-CoV-2. Pudimos observar que la expresi\u00f3n de los 4 ant\u00edgenos analizados es bastante elevada en comparaci\u00f3n con muestras que no presentaban s\u00edntomas.<\/p>\n<p>Adicionalmente, tambi\u00e9n se evalu\u00f3 la prueba en 44 muestras de plasma incluyendo 29 pacientes de COVID-19, 14 de ellos con enfermedad leve y 15 con enfermedad grave.<\/p>\n<p>Cada muestra de plasma fue analizada en un rango de diluciones (1:100 a 1:5400) para tres isotipos (IgA, IgG, IgM). El an\u00e1lisis inicial mostr\u00f3 una clara diferencia entre la se\u00f1al obtenida para los anticuerpos IgG contra los cuatro ant\u00edgenos entre los controles sanos y los pacientes de COVID-19. Como era de esperar, aunque los anticuerpos IgA e IgM espec\u00edficos del SARS-CoV-2 se detectaron en varios pacientes, no estaban presentes en todos los sueros analizados.<\/p>\n<\/div>\n<\/li>\n<li>\n<h3>\u00bfExiste relaci\u00f3n entre respuesta y tipo de vacuna?<\/h3>\n<div>\n<p>Si, en los estudios que hemos realizado hasta el momento hemos podido identificar algunas diferencias de respuesta seg\u00fan el tipo de vacuna, generando as\u00ed diferentes tipos de perfiles de respuesta inmunol\u00f3gica a las vacunas. Esperamos poder continuar ampliando estos datos en el futuro en este sentido.<\/p>\n<\/div>\n<\/li>\n<li>\n<h3>No todos los individuos que han pasado la infecci\u00f3n tienen Nucleoc\u00e1psida positiva \u00bfc\u00f3mo podemos afirmar entonces que una Nucleoc\u00e1psida positiva no sea debido a la vacuna y no a una infecci\u00f3n natural?<\/h3>\n<div>\n<p>Efectivamente durante nuestras investigaciones hemos encontrado casos en algunas muestras pedi\u00e1tricas en las que no se encuentra la Nucleoc\u00e1psida positiva, adem\u00e1s esta prote\u00edna puede expresarse tambi\u00e9n como resultado de la vacunaci\u00f3n en los casos de virus inactivados. Sin embargo, el ensayo tambi\u00e9n identifica anticuerpos frente a la proteasa principal del virus (Mpro) que en ning\u00fan caso se expresa por vacunaci\u00f3n y es una enzima clave en el proceso de replicaci\u00f3n viral del virus durante la infecci\u00f3n natural, por lo que, en estos casos, se podr\u00eda diferenciar con gran exactitud a trav\u00e9s de los datos proporcionados con esta prote\u00edna.<\/p>\n<\/div>\n<\/li>\n<li>\n<h3>\u00bfSe puede discriminar los resultados de un paciente infectado de un paciente infectado y vacunado?<\/h3>\n<div>\n<p>Hemos podido observar una diferenciaci\u00f3n de perfiles en este sentido cuando la expresi\u00f3n de la IgM est\u00e1 en su pico m\u00e1s alto, dado que no hemos encontrados casos de titulaci\u00f3n alta de anticuerpos IgM en individuos vacunados, los anticuerpos generados como resultado de la vacunaci\u00f3n son predominantemente IgG e IgA frente a las prote\u00ednas S y RBD.<\/p>\n<\/div>\n<\/li>\n<li>\n<h3>\u00bfSe ha evaluado si las concentraciones var\u00edan en el tiempo?<\/h3>\n<div>\n<p>Si, en nuestros estudios con este ensayo hemos observado diferencias significativas en las concentraciones de anticuerpos en el tiempo, y esperamos poder aportar m\u00e1s informaci\u00f3n sobre este asunto en el futuro.<\/p>\n<\/div>\n<\/li>\n<\/ul>\n<p><img decoding=\"async\" src=\"\/wp-content\/uploads\/2021\/05\/Imagen1.png\" alt=\"\"><\/p>\n<div>\n<p>Esta actividad se encuadra dentro del marco del proyecto IDIAL NET, cofinanciado por el Fondo Europeo de Desarrollo Regional (FEDER) a trav\u00e9s del Programa INTERREG V-A Espa\u00f1a Portugal (POCTEP) 2014-2020 de la Comisi\u00f3n Europea.<\/p>\n<\/div>\n<p><!--more--><br \/>\n<!-- {\"type\":\"layout\",\"children\":[{\"type\":\"section\",\"props\":{\"style\":\"default\",\"width\":\"default\",\"vertical_align\":\"middle\",\"title_position\":\"top-left\",\"title_rotation\":\"left\",\"title_breakpoint\":\"xl\",\"image_position\":\"center-center\"},\"children\":[{\"type\":\"row\",\"children\":[{\"type\":\"column\",\"props\":{\"image_position\":\"center-center\",\"media_overlay_gradient\":\"\",\"width_medium\":\"\"},\"children\":[{\"type\":\"headline\",\"props\":{\"title_element\":\"h1\",\"content\":\"<strong><strong>Webinar | Serolog\\u00eda SARS-CoV-2 por Citometr\\u00eda de Flujo.<br \\\/><\\\/strong><\\\/strong>\\n\n\n<p><\\\/p>\",\"title_font_family\":\"secondary\",\"margin_remove_top\":true,\"title_decoration\":\"bullet\",\"text_align\":\"center\"},\"modified\":\"2021-03-22T13:36:58.739Z\",\"name\":\"CORONAVIRUS PULSAR TITULO 3\"},{\"type\":\"text\",\"props\":{\"margin\":\"default\",\"column_breakpoint\":\"m\",\"content\":\"\n\n<p style=\\\"text-align: center;\\\">Diferenciando anticuerpos generados tras la infecci\\u00f3n natural por SARS-CoV-2 de anticuerpos generados posvacunaci\\u00f3n.<\\\/p>\"}},{\"type\":\"video\",\"props\":{\"video_controls\":true,\"margin\":\"default\",\"video_width\":\"800\",\"text_align\":\"center\",\"video\":\"https:\\\/\\\/youtu.be\\\/2NX7JNboOYQ\"}}]}]}]},{\"type\":\"section\",\"props\":{\"style\":\"default\",\"width\":\"default\",\"vertical_align\":\"middle\",\"title_position\":\"top-left\",\"title_rotation\":\"left\",\"title_breakpoint\":\"xl\",\"image_position\":\"center-center\",\"padding_remove_top\":true},\"children\":[{\"type\":\"row\",\"children\":[{\"type\":\"column\",\"props\":{\"image_position\":\"center-center\",\"media_overlay_gradient\":\"\"},\"children\":[{\"type\":\"text\",\"props\":{\"margin\":\"default\",\"column_breakpoint\":\"m\",\"content\":\"\n\n<h3><strong>Informaci\\u00f3n del webinar<\\\/strong><strong>:<\\\/strong><\\\/h3>\\n\n\n<ul>\\n\n\n<li><strong>Fecha:<\\\/strong> 9 de junio de 2021<\\\/li>\\n\n\n<li><strong>Hora<\\\/strong>: 17:00 \\u2013 18:00h (Madrid, Espa\\u00f1a)<\\\/li>\\n\n\n<li><strong>Idioma:<\\\/strong> Espa\\u00f1ol\\u00a0<\\\/li>\\n\n\n<li><strong>Formato:<\\\/strong>Transmisi\\u00f3n online en Zoom - suscr\\u00edbete al webinar para recibir el enlace de asistencia.<\\\/li>\\n\n\n<li><strong>Precio<\\\/strong>: Gratis<\\\/li>\\n<\\\/ul>\\n\n\n<h3><strong>Objetivos:<\\\/strong><\\\/h3>\\n\n\n<ul>\\n\n\n<li>Comprender el funcionamiento de este ensayo por citometr\\u00eda de flujo y c\\u00f3mo de forma sencilla se detectan 3 inmunoglobulinas para 4 prote\\u00ednas virales.<\\\/li>\\n\n\n<li>Mostrar en vivo toda la informaci\\u00f3n que se genera gracias a la citometr\\u00eda de flujo sobre la respuesta inmunol\\u00f3gica tras la infecci\\u00f3n natural y posvacunaci\\u00f3n.<\\\/li>\\n\n\n<li>Ronda de preguntas final: Necesidades y oportunidades que ofrece este ensayo como prueba serol\\u00f3gica\\n\n\n<ul>\\n\n\n<li style=\\\"list-style-type: none;\\\">\\n\n\n<ul><\\\/ul>\\n<\\\/li>\\n<\\\/ul>\\n<\\\/li>\\n<\\\/ul>\"}}]}]}]},{\"type\":\"section\",\"props\":{\"style\":\"default\",\"width\":\"default\",\"vertical_align\":\"middle\",\"title_position\":\"top-left\",\"title_rotation\":\"left\",\"title_breakpoint\":\"xl\",\"image_position\":\"center-center\",\"padding_remove_top\":true},\"children\":[{\"type\":\"row\",\"children\":[{\"type\":\"column\",\"props\":{\"image_position\":\"center-center\",\"media_overlay_gradient\":\"\"},\"children\":[{\"type\":\"headline\",\"props\":{\"title_element\":\"h1\",\"content\":\"<strong>Preguntas y Respuestas<\\\/strong>\",\"title_font_family\":\"secondary\",\"margin_remove_top\":true,\"title_decoration\":\"bullet\"},\"modified\":\"2021-03-22T13:36:58.739Z\",\"name\":\"CORONAVIRUS PULSAR TITULO 3\"},{\"type\":\"accordion\",\"props\":{\"show_image\":true,\"show_link\":true,\"collapsible\":true,\"content_column_breakpoint\":\"m\",\"image_svg_color\":\"emphasis\",\"image_align\":\"bottom\",\"image_grid_width\":\"1-2\",\"image_grid_breakpoint\":\"m\",\"link_text\":\"Ver m\\u00e1s\",\"link_style\":\"secondary\",\"image_margin\":\"medium\",\"content_margin\":\"medium\",\"image_vertical_align\":true,\"content_column\":\"\",\"content_dropcap\":false,\"block_align\":\"center\",\"text_align\":\"justify\",\"image_width\":\"300\"},\"children\":[{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"\\u00bfQu\\u00e9 anticuerpos identifica el ensayo?\",\"content\":\"\n\n<p>Este ensayo multiant\\u00edgeno por citometr\\u00eda de flujo mide la presencia o ausencia de tres inmunoglobulinas (IgG, IgA e IgM) contra cuatro ant\\u00edgenos diferentes del SARS-CoV-2 simult\\u00e1neamente. Estos 4 ant\\u00edgenos son:<\\\/p>\\n\n\n<ul>\\n\n\n<li>Dominio de uni\\u00f3n al receptor (RBD) de la glicoprote\\u00edna S. Este dominio RBD es un tr\\u00edmero estabilizado permite la detecci\\u00f3n precisa de anticuerpos neutralizantes del subtipo IgG.<\\\/li>\\n\n\n<li>Prote\\u00edna SPIKE. Contamos con una glicoprote\\u00edna trim\\u00e9rica Spike la cual es la forma nativa estabilizada de la prote\\u00edna Spike del SARS-CoV-2.<\\\/li>\\n\n\n<li>Desde el punto de vista del diagn\\u00f3stico, el uso de estructuras trim\\u00e9ricas para la SPIKE y el RBD detecta un repertorio m\\u00e1s amplio de Anticuerpos Neutralizantes mejorando la sensibilidad y la precisi\\u00f3n del monitoreo del estado inmune.<\\\/li>\\n\n\n<li>Prote\\u00edna de la nucleoc\\u00e1pside (N). Esta prote\\u00edna es muy inmunog\\u00e9nica y es la m\\u00e1s abundante del virus. Presenta una gran afinidad por el RNA viral con el que interacciona.<\\\/li>\\n\n\n<li>Principal proteasa del virus o la proteasa tipo 3C (3CLpro, Mpro) se caracteriza entre otras cosas porque s\\u00f3lo se expresa si el virus entra en nuestras c\\u00e9lulas y por ser igual de inmunog\\u00e9nica que la Nucleoc\\u00e1psida. Investigadores del CSIC demostraron su utilidad para su uso en ensayos serol\\u00f3gicos.<\\\/li>\\n<\\\/ul>\\n\n\n<p>El motivo principal de analizar los 4 ant\\u00edgenos al mismo tiempo radica en la heterogeneidad de la respuesta inmune de cada paciente. Cuanta m\\u00e1s informaci\\u00f3n obtengamos en an\\u00e1lisis de cada paciente, mejor diagn\\u00f3stico podremos ofrecer. Al ir dirigido contra 4 ant\\u00edgenos es m\\u00e1s dif\\u00edcil que se escape un falso negativo de un posible infectado o vacunado.<\\\/p>\",\"image\":\"\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"\\u00bfLa glicoprote\\u00edna de la esp\\u00edcula es una prote\\u00edna recombinante? \\u00bfSe puede comparar en su totalidad a la secuencia completa de la prote\\u00edna S nativa? \\u00bfConservar\\u00eda integra la estructura cuaternaria y glicosilaciones? \",\"content\":\"\n\n<p>Efectivamente, la prote\\u00edna S utilizada en este kit es una prote\\u00edna recombinante y se puede comparar en su totalidad con la secuencia completa de la prote\\u00edna S nativa. Adem\\u00e1s, conserva \\u00edntegra la estructura cuaternaria y glicosilaciones dado que se expresa en un sistema de expresi\\u00f3n en mam\\u00edferos.<\\\/p>\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"\\u00bfEs la prote\\u00edna Mpro m\\u00e1s espec\\u00edfica que la Nucleoc\\u00e1psida?\",\"content\":\"\n\n<p>Si, la prote\\u00edna Mpro ha demostrado ser m\\u00e1s espec\\u00edfica que la Nucleoc\\u00e1psida.<\\\/p>\\n\n\n<p>Como prueba de la especificidad llevada a cabo en la validaci\\u00f3n del kit, se analiz\\u00f3 la posible reactividad cruzada de los anticuerpos contra otros microorganismos que producen s\\u00edntomas similares a la infecci\\u00f3n por SARS-CoV-2. De esta manera se seleccionaron 15 muestras caracterizadas como positivas para IgG para los siguientes microorganismos: MERS-CoV, H. Influenzae, RSV, Influenza A, Influenza B , Parainfluenza, Adenovirus, Enterovirus M. pneumoniae, Legionella, C. pneumoniae.\\u00a0 Como control negativo se usaron muestras prepand\\u00e9micas.\\u00a0<\\\/p>\\n\n\n<p>Observamos en esta prueba c\\u00f3mo hay un patr\\u00f3n muy claro de que las muestras positivas analizadas no presentan reactividad cruzada con ninguno de estas enfermedades que producen s\\u00edntomas similares al SARS-CoV-2. Los resultados obtenidos para la IgM fueron menos espec\\u00edficos que para la IgA y la IgG. Adem\\u00e1s, de los 4 ant\\u00edgenos analizados y que incluye el ensayo, se descubri\\u00f3 que la Mpro es m\\u00e1s espec\\u00edfica que la Nucleoc\\u00e1psida. Y esto es debido probablemente a la alta homolog\\u00eda que la Nucleoc\\u00e1psida con otros coronavirus. La Mpro es la que presenta una menor homolog\\u00eda entre otros coronavirus, por lo que la convierte en la prote\\u00edna ideal para detectar el SARS-CoV-2.<\\\/p>\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"\\u00bfTen\\u00e9is alg\\u00fan ensayo ELISA para la detecci\\u00f3n de la prote\\u00edna Mpro?\",\"content\":\"\n\n<p>Si, disponemos de un ensayo ELISA para la detecci\\u00f3n de anticuerpos IgG e IgA frente a la proteasa Mpro\\\/3CLpro que ha demostrado ser altamente sensible y espec\\u00edfico. Toda la informaci\\u00f3n relativa al kit, datos de rendimiento y protocolo de ejecuci\\u00f3n lo pueden encontrar en la p\\u00e1gina de producto de este ensayo al que puede acceder a trav\\u00e9s del siguiente enlace a continuaci\\u00f3n.<\\\/p>\",\"image\":\"\",\"link\":\"sars-cov-2-elisa-igg-iga-assays\\\/?lang=es\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"\\u00bfQu\\u00e9 ventaja tiene a\\u00f1adir RBD adem\\u00e1s de S? \\u00bfhab\\u00e9is visto diferencias entre ambas que pod\\u00e1is correlacionar con el grado de infecci\\u00f3n o tipo de vacuna?\",\"content\":\"\n\n<p>La principal diferencia de informaci\\u00f3n que aporta la RBD es que se ha demostrado que los anticuerpos que se generan frente a esta prote\\u00edna son neutralizantes, sin embargo, si identificamos la prote\\u00edna S en su totalidad, identificaremos tambi\\u00e9n anticuerpos no neutralizantes, y de este modo se puede ver la diferencia en la titulaci\\u00f3n de los tipos de anticuerpos.<\\\/p>\\n\n\n<p>Si, en los estudios que hemos realizado hasta el momento hemos podido observar diferencias relacionadas con el tipo de vacunas, esperamos poder dar m\\u00e1s datos sobre estas diferencias pr\\u00f3ximamente.<\\\/p>\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"\\u00bfCu\\u00e1l es el fundamento del m\\u00e9todo del ensayo?\",\"content\":\"\n\n<div class=\\\"el-item uk-open\\\">\\n\n\n<div class=\\\"uk-accordion-content uk-margin-remove-first-child\\\">\\n\n\n<div class=\\\"el-content uk-panel uk-margin-top\\\">\\n\n\n<p>Este es un ensayo inmunol\\u00f3gico basado en microesferas por citometr\\u00eda de flujo. En primer lugar, tendremos beads tapizadas con las prote\\u00ednas.<\\\/p>\\n\n\n<p>Estas beads son microsferas magn\\u00e9ticas de 6 micras de tama\\u00f1o, autofluorescentes para el canal del FL3 y FL4 y que presentan una discriminaci\\u00f3n discreta de intensidad.<\\\/p>\\n\n\n<p>Cuando a\\u00f1adamos la muestra, los anticuerpos de esa muestra se unir\\u00e1n a la microesfera magn\\u00e9tica. Estos anticuerpos se encuentran conjugados a tres fluorocromos diferentes: FITC, PE y PE-Cyanine7 respectivamente.<\\\/p>\\n\n\n<p>De este modo, cuando incorporemos la soluci\\u00f3n en el cit\\u00f3metro estos fluorocromos emitir\\u00e1n una se\\u00f1al del color correspondiente se\\u00f1alando la presencia de anticuerpos de cada tipo para cada prote\\u00edna que se han unido a la bead.\\u00a0<\\\/p>\\n\n\n<p>Una importante caracter\\u00edstica de estas microsferas es que se suministran a una concentraci\\u00f3n de mil microesferas por test. Cada una de estas microesferas se corresponder\\u00eda con un ensayo que se realiza en un pocillo tipo ELISA. Esto quiere decir que por cada test que estemos efectuando, es como si estuvi\\u00e9semos llevando a cabo 1000 ELISAS de manera simult\\u00e1nea. El resultado que obtenemos en cada test es la media de llevar a cabo esos 1000 ELISAS, lo que lo convierte en un ensayo muy potente, fiable y reproducible.<\\\/p>\\n<\\\/div>\\n<\\\/div>\\n<\\\/div>\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"\\u00bfCu\\u00e1nto tiempo requiere el ensayo?\",\"content\":\"\n\n<p>En apenas 8 pasos y en un tiempo aproximado de una hora y media, obtendremos las muestras listas para ser analizada en el cit\\u00f3metro. Este test es de tipo formato abierto, es decir, que se puede usar en cualquier cit\\u00f3metro de flujo, no tiene un equipo dedicado ni tiene que ser analizado con un software espec\\u00edfico. Accede a este video para consultar el protocolo completo:<\\\/p>\",\"link\":\"https:\\\/\\\/www.youtube.com\\\/watch?v=Wttj2BaDCtw&t=35s\",\"link_text\":\"Ver video\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"content\":\"\n\n<p>Si, el ensayo multiplex SARS-CoV-2 ha sido calibrado frente al Primer Est\\u00e1ndar Internacional de la OMS para Inmunoglobulina anti-SARS-CoV-2 (humana)<\\\/p>\\n\n\n<p>En este sentido, es posible informar cuantitativamente de la concentraci\\u00f3n de inmunoglobulinas IgG en Unidades Internacionales (UI\\\/ml) frente a RBD o en Unidades de Anticuerpos Unidos (BAU\\\/ml) frente a S, N y Mpro. Para ello, el kit incluye un calibrador o est\\u00e1ndar de concentraci\\u00f3n con el que poder hacer una recta de calibraci\\u00f3n mediante diluciones seriadas para cada uno de los ant\\u00edgenos v\\u00edricos empleados en el test (RBD, S, N, Mpro) en la que interpolar los valores de fluorescencia resultantes del ensayo de las muestras, obteniendo de esta manera la concentraci\\u00f3n en UI\\\/ml o BAU\\\/ml correspondiente a cada muestra.<\\\/p>\",\"title\":\"\\u00bfEl est\\u00e1ndar est\\u00e1 calibrado con alg\\u00fan est\\u00e1ndar internacional?\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"\\u00bfEl kit incluye controles positivos y negativos para IgG, IgA e IgM? \",\"content\":\"\n\n<p>El kit cuenta con controles positivo y negativo para las 3 inmunoglobulinas, (IgA, IgG e IgM). Esos controles vienen en dos viales separados. La funci\\u00f3n de los controles positivo y negativo que incluye el kit es la de servir como control de calidad del ensayo, comparando los resultados en UA\\\/ml con los datos que proporcionamos en el certificado de an\\u00e1lisis. A continuaci\\u00f3n, mostramos un ejemplo de tabla del certificado de an\\u00e1lisis de un lote aleatorio. Estos datos var\\u00edan entre lotes, y se proporcionan tras la adquisici\\u00f3n del kit.<\\\/p>\\n\n\n<p>Tambi\\u00e9n destacar que recomendamos utilizar un control positivo y negativo propio de cada laboratorio.<\\\/p>\",\"image\":\"wp-content\\\/uploads\\\/2021\\\/06\\\/certificado-de-analisis-preguntas.png\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"\\u00bfC\\u00f3mo se determina el l\\u00edmite de positividad? \",\"content\":\"\n\n<p>Seg\\u00fan hemos establecido en la ficha t\\u00e9cnica de producto para la interpretaci\\u00f3n de los resultados, el umbral o valor lim\\u00edtrofe es igual al valor medio a partir de los valores de intensidad mediana de fluorescencia de las r\\u00e9plicas correspondientes al control negativo por 3 veces la desviaci\\u00f3n est\\u00e1ndar.<\\\/p>\\n\n\n<p><strong><u>Umbral (valor lim\\u00edtrofe) = \\u00b5 (mediana) \\u00b1 3\\u03c3 (del control negativo).<\\\/u><\\\/strong><\\\/p>\\n\n\n<p>Pueden encontrar toda la informaci\\u00f3n sobre los componentes del kit, protocolo de ejecuci\\u00f3n e interpretaci\\u00f3n de los resultados en la p\\u00e1gina de producto de la web accediendo al siguiente enlace.<\\\/p>\",\"link\":\"sars-cov-2-multiantigen-igg-iga-assay\\\/?lang=es\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"\\u00bfHay una hoja de reporte tipo del ensayo?\",\"content\":\"\n\n<p>Disponemos de multitud de materiales de consulta sobre este ensayo accediendo a la p\\u00e1gina del producto, donde tambi\\u00e9n est\\u00e1 disponible la ficha t\\u00e9cnica del ensayo con toda la informaci\\u00f3n de los ensayos realizados para su validaci\\u00f3n. A continuaci\\u00f3n, dejamos un enlace a esta p\\u00e1gina donde poder descargarse dicha informaci\\u00f3n.<\\\/p>\",\"link\":\"sars-cov-2-multiantigen-igg-iga-assay\\\/?lang=es\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"content\":\"\n\n<p>Si, el ensayo ha sido validado para la mayor\\u00eda de los cit\\u00f3metros de flujo de las marcas comerciales m\\u00e1s conocidas como Becton Dickinson, Beckman Coulter y Cytek con resultados \\u00f3ptimos.<\\\/p>\",\"title\":\"\\u00bfSe ha validado el ensayo con diferentes plataformas de citometr\\u00eda de flujo? \"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"\\u00bfHan tenido problemas especiales para configurar el cit\\u00f3metro antes de realizar los ensayos? \\u00bfqu\\u00e9 consejos podr\\u00eda dar para evitar problemas durante la adquisici\\u00f3n de la muestra? \",\"content\":\"\n\n<p>Para la correcta configuraci\\u00f3n de los cit\\u00f3metros puede descargar los datos de configuraci\\u00f3n para diferentes plataformas en nuestra p\\u00e1gina de producto, as\\u00ed mismo, en esta misma p\\u00e1gina dispone de un video tutorial de c\\u00f3mo ejecutar el protocolo del ensayo y c\\u00f3mo realizar la estrategia de <em>gating<\\\/em> en el cit\\u00f3metro. En especial, una recomendaci\\u00f3n que hacemos en este sentido es no adquirir las microesferas a velocidad m\\u00e1xima para evitar dobletes y debris.<\\\/p>\\n\n\n<p>Puede acceder al siguiente enlace para descargar estos materiales, o ponerse en contacto con nosotros para informaci\\u00f3n adicional personalizada.<\\\/p>\",\"link\":\"sars-cov-2-multiantigen-igg-iga-assay\\\/?lang=es\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"En relaci\\u00f3n con la resoluci\\u00f3n y separaci\\u00f3n de la poblaci\\u00f3n de beads en cit\\u00f3metros convencionales y no espectrales. \\u00bfEs posible que el ruido electr\\u00f3nico pueda dificultar la elecci\\u00f3n de \\u00e9stas o enmascarar resultados? \\u00bfel treshold para poder realizar la adquisici\\u00f3n debe ser bajo?\",\"content\":\"\n\n<p>La realizaci\\u00f3n de este ensayo es \\u00f3ptima en cualquier cit\\u00f3metro convencional, en la p\\u00e1gina de producto del kit proporcionamos los datos de los settings para la configuraci\\u00f3n del cit\\u00f3metro y en esa informaci\\u00f3n viene incluido el treshold para poder realizar la adquisici\\u00f3n correctamente.\\u00a0 A modo de ejemplo adjuntamos una imagen de c\\u00f3mo se separan las 4 poblaciones en un cit\\u00f3metro no expectral (BD Facs Calibur). Puede consultar los datos de configuraci\\u00f3n del cit\\u00f3metro en el siguiente enlace:<\\\/p>\",\"image\":\"wp-content\\\/uploads\\\/2021\\\/06\\\/160621-Calibur-Preguntas.jpg\",\"link\":\"sars-cov-2-multiantigen-igg-iga-assay\\\/?lang=es\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"\\u00bfTen\\u00e9is informaci\\u00f3n sobre la respuesta inmune despu\\u00e9s de la vacunaci\\u00f3n?\",\"content\":\"\n\n<p>Si, realizamos un estudio entre individuos vacunados con vacunas de Pfizer, Moderna y AstraZeneca. Se realiz\\u00f3 una comparaci\\u00f3n de las respuestas IgG e IgA contra los cuatro ant\\u00edgenos del SARS-CoV-2 de 65 individuos vacunados y se compar\\u00f3 con la de los individuos infectados naturalmente. Como se esperaba, los individuos vacunados s\\u00f3lo mostraron reacci\\u00f3n a los ant\\u00edgenos S y RBD, y la IgG fue el isotipo predominante en los vacunados mientras que los sueros de los donantes infectados naturalmente presentaban anticuerpos contra los cuatro ant\\u00edgenos virales.\\u00a0<\\\/p>\\n\n\n<p>Gracias a este ensayo podemos confirmar que s\\u00f3lo se producen anticuerpos frente a la prote\\u00edna empleada en la vacuna, mientras que en una persona que ha sufrido la infecci\\u00f3n, tambi\\u00e9n se generan anticuerpos frente al resto de ant\\u00edgenos incluidos en este test.<\\\/p>\\n\n\n<p>Pero como adem\\u00e1s el test es tambi\\u00e9n cuantitativo, nos permiti\\u00f3 saber la concentraci\\u00f3n y cantidad de las Ig generadas bien por efecto de las vacunas o por infecci\\u00f3n natural. De hecho, en an\\u00e1lisis internos hemos confirmado que las vacunas, aunque son intramusculares, generan IgA (para SPIKE y para RBD) y no tanto IgM.<\\\/p>\\n\n\n<p>Curiosamente, s\\u00f3lo se observaron respuestas m\\u00ednimas de IgA en los donantes vacunados, en contraste con los individuos infectados naturalmente que mostraron t\\u00edtulos elevados de IgA.<\\\/p>\\n\n\n<p>Las diferencias en las respuestas a diferentes isotipos Ig para las 4 prote\\u00ednas nos permiti\\u00f3 clasificar pacientes vacunados de pacientes que desarrollan anticuerpos como resultado de la vacunaci\\u00f3n. Pero, adem\\u00e1s, el test nos di\\u00f3 informaci\\u00f3n sobre la poblaci\\u00f3n vacunada, como estaba respondiendo y si estaban generando anticuerpos o no frente a esas vacunas.\\u00a0<\\\/p>\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"\\u00bfPuede este ensayo predecir la enfermedad grave?\",\"content\":\"\n\n<p>Podemos afirmar que, gracias al an\\u00e1lisis simult\\u00e1neo de los 4 ant\\u00edgenos y de las 3 inmunoglobulinas de manera simult\\u00e1nea podemos clasificar a los pacientes seg\\u00fan la severidad de la enfermedad.<\\\/p>\\n\n\n<p>En el proceso de validaci\\u00f3n del kit se realiz\\u00f3 una prueba de sensibilidad donde se compararon 35 muestras que presentaban s\\u00edntomas frente a muestras negativas y\\\/o pre-pand\\u00e9micas que no presentaban s\\u00edntomas relacionados con el SARS-CoV-2. Pudimos observar que la expresi\\u00f3n de los 4 ant\\u00edgenos analizados es bastante elevada en comparaci\\u00f3n con muestras que no presentaban s\\u00edntomas.<\\\/p>\\n\n\n<p>Adicionalmente, tambi\\u00e9n se evalu\\u00f3 la prueba en 44 muestras de plasma incluyendo 29 pacientes de COVID-19, 14 de ellos con enfermedad leve y 15 con enfermedad grave.<\\\/p>\\n\n\n<p>Cada muestra de plasma fue analizada en un rango de diluciones (1:100 a 1:5400) para tres isotipos (IgA, IgG, IgM). El an\\u00e1lisis inicial mostr\\u00f3 una clara diferencia entre la se\\u00f1al obtenida para los anticuerpos IgG contra los cuatro ant\\u00edgenos entre los controles sanos y los pacientes de COVID-19. Como era de esperar, aunque los anticuerpos IgA e IgM espec\\u00edficos del SARS-CoV-2 se detectaron en varios pacientes, no estaban presentes en todos los sueros analizados.<\\\/p>\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"\\u00bfExiste relaci\\u00f3n entre respuesta y tipo de vacuna?\",\"content\":\"\n\n<p>Si, en los estudios que hemos realizado hasta el momento hemos podido identificar algunas diferencias de respuesta seg\\u00fan el tipo de vacuna, generando as\\u00ed diferentes tipos de perfiles de respuesta inmunol\\u00f3gica a las vacunas. Esperamos poder continuar ampliando estos datos en el futuro en este sentido.<\\\/p>\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"No todos los individuos que han pasado la infecci\\u00f3n tienen Nucleoc\\u00e1psida positiva \\u00bfc\\u00f3mo podemos afirmar entonces que una Nucleoc\\u00e1psida positiva no sea debido a la vacuna y no a una infecci\\u00f3n natural?\",\"content\":\"\n\n<p>Efectivamente durante nuestras investigaciones hemos encontrado casos en algunas muestras pedi\\u00e1tricas en las que no se encuentra la Nucleoc\\u00e1psida positiva, adem\\u00e1s esta prote\\u00edna puede expresarse tambi\\u00e9n como resultado de la vacunaci\\u00f3n en los casos de virus inactivados. Sin embargo, el ensayo tambi\\u00e9n identifica anticuerpos frente a la proteasa principal del virus (Mpro) que en ning\\u00fan caso se expresa por vacunaci\\u00f3n y es una enzima clave en el proceso de replicaci\\u00f3n viral del virus durante la infecci\\u00f3n natural, por lo que, en estos casos, se podr\\u00eda diferenciar con gran exactitud a trav\\u00e9s de los datos proporcionados con esta prote\\u00edna.<\\\/p>\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"\\u00bfSe puede discriminar los resultados de un paciente infectado de un paciente infectado y vacunado?\",\"content\":\"\n\n<p>Hemos podido observar una diferenciaci\\u00f3n de perfiles en este sentido cuando la expresi\\u00f3n de la IgM est\\u00e1 en su pico m\\u00e1s alto, dado que no hemos encontrados casos de titulaci\\u00f3n alta de anticuerpos IgM en individuos vacunados, los anticuerpos generados como resultado de la vacunaci\\u00f3n son predominantemente IgG e IgA frente a las prote\\u00ednas S y RBD.<\\\/p>\"}},{\"type\":\"accordion_item\",\"props\":{\"title\":\"\\u00bfSe ha evaluado si las concentraciones var\\u00edan en el tiempo?\",\"content\":\"\n\n<p>Si, en nuestros estudios con este ensayo hemos observado diferencias significativas en las concentraciones de anticuerpos en el tiempo, y esperamos poder aportar m\\u00e1s informaci\\u00f3n sobre este asunto en el futuro.<\\\/p>\"}}],\"modified\":\"2021-04-28T06:57:45.403Z\",\"name\":\"FAQS-MPRO\"}]}]}]},{\"type\":\"section\",\"props\":{\"style\":\"muted\",\"width\":\"default\",\"vertical_align\":\"middle\",\"title_position\":\"top-left\",\"title_rotation\":\"left\",\"title_breakpoint\":\"xl\",\"image_position\":\"center-center\",\"padding_remove_top\":false},\"children\":[{\"type\":\"row\",\"props\":{\"layout\":\"1-2,1-2\"},\"children\":[{\"type\":\"column\",\"props\":{\"image_position\":\"center-center\",\"media_overlay_gradient\":\"\",\"width_medium\":\"1-2\"},\"children\":[{\"type\":\"image\",\"props\":{\"margin\":\"default\",\"image_svg_color\":\"emphasis\",\"image\":\"wp-content\\\/uploads\\\/2021\\\/05\\\/Imagen1.png\",\"image_width\":\"400\",\"text_align\":\"center\"}}]},{\"type\":\"column\",\"props\":{\"image_position\":\"center-center\",\"media_overlay_gradient\":\"\",\"width_medium\":\"1-2\"},\"children\":[{\"type\":\"text\",\"props\":{\"margin\":\"default\",\"column_breakpoint\":\"m\",\"content\":\"\n\n<p>Esta actividad se encuadra dentro del marco del proyecto IDIAL NET, cofinanciado por el Fondo Europeo de Desarrollo Regional (FEDER) a trav\\u00e9s del Programa INTERREG V-A Espa\\u00f1a Portugal (POCTEP) 2014-2020 de la Comisi\\u00f3n Europea.<\\\/p>\"}}]}]}]}],\"version\":\"2.4.21\"} --><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Webinar | Serolog\u00eda SARS-CoV-2 por Citometr\u00eda de Flujo. 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